Transheep推出双荧光素酶报告基因系统(慢病毒介导)
报告基因检测，是真核基因表达调控研究的常用方法，常用于MirRNA靶点验证，启动子效率验证，信号通路检测等报告基因检测相关实验。由于检测光量子的方法非常敏感，采用生物发光(bioluminescent)法，是报告基因检测最常用的有效手段。在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。 通常使用萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和海肾荧光素酶(Ranilla luciferase)催化的发光反应。双荧光素酶报告基因测试系统在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,准确，简便。
TsLVGLTM信号通路报告系统
TsLVGLTM信号通路报告系统是权阳生物自主研发的用于检测通路基因转录活性水平为目的的报告基因载体，含有若启动子miniP，用于研究细胞内信号通路中转录应答元件的活性。使用luc2为报告基因，表达效率远高于pGL3系列的Luc+，优化后的luc具有更少的隐性调控序列，半衰期延长等优点。载体使用慢病毒骨架系统，携带Puro抗性，可进行真核细胞系的筛选，实现稳转。主要用于转录活性、肿瘤治疗药物的研发以及基因过表达和RNAi的表型分析等相关研究。
相关载体
预装应答原件表
| EnhancerElement |
Abbrv. |
Transcriptionfactor(s) |
Signaltransductionpathway(s) |
| Activatorprotein1 |
AP1 |
c-jun/c-fos |
JNK |
| cAMPresponseelement |
CRE |
ATF2/CREB |
ATF2/CREB |
| E-boxDNAbindingelement |
E-box |
Myc/Max |
cellproliferation |
| E2FDNAbindingelement |
E2F |
E2F/DP1 |
cellcycleprogression |
| Estrogenresponseelement |
ERE |
estrogenreceptor |
estrogenreceptor |
| Glucocorticoidresponseelement |
GRE |
GR |
glucocorticoid/HSP90 |
| Heatshockresponseelement |
HSE |
HSF |
heatshockresponse |
| IFN-γactivationsequence |
GAS |
STAT1/STAT1 |
proliferation/inflammation |
| Interferon-stimulated |
ISRE |
STAT1/STAT2 |
proliferation/inflammation
responseelement |
| STAT3responseelementSTAT3 |
STAT3 |
STAT3/STAT3 |
proliferation/inflammation |
| NuclearfactorofactivatedT-cells |
NFAT |
NFAT |
PKC&Ca2+/calcineurin |
| NuclearfactorofκBcells |
NFκB |
NFκB |
NFκB |
| p53responseelement |
p53 |
p53 |
cellgrowth/apoptosis |
| Retinoicacidresponseelement |
RARE |
RAR |
retinoicacidreceptor |
| Rbresponseelement |
Rb |
Rb |
cellcycleprogression |
| Serumresponseelement |
SRE |
Elk-1/SRF |
MAPK/JNK |
| Thyroidresponseelement |
TRE |
Thyroidreceptor |
thyroidhormonereceptor |
相关技术服务
相关载体
| 载体介绍 |
载体名称 |
作用位点 |
出品公司 |
| 信号通路报告系统 |
pLvGL4-minipLuc2P |
|
Transheep |
| Rluc对照质粒 |
pLvGL4-minipLuc2P |
|
Transheep |
| Luc对照质粒 |
pTA-Luc |
|
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pGAS-TA-Luc |
STAT1/STAT1 |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pSTAT3-TA-Luc |
STAT3/STAT3 |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pISRE-TA-Luc |
STAT1/STAT2 |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pIκB-EGFP |
NFκB |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pNFAT-TA-Luc |
NFAT |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pCaspase3-sensor |
Caspase3-sensor |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pAP1(PMA)-TA-Luc |
c-jun/c-fos |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pCRE-Luc |
ATF2/CREB |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pGRE-Luc |
GR |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pHSE-Luc |
HSF |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pE2F-TA-Luc |
E2F/DP1 |
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
pTA-AP1-Luc |
c-jun/c-fos |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-CRE-Luc |
ATF2/CREB |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-E-box-Luc |
Myc/Max |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-E2F-Luc |
E2F/DP1 |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-ERE-Luc |
estrogenreceptor |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-GRE-Luc |
GR |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-HSE-Luc |
HSF |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-GAS-Luc |
STAT1/STAT1 |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-ISRE-Luc |
STAT1/STAT2 |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-STAT3-Luc |
STAT3/STAT3 |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-NFAT-Luc |
NFAT |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-NFκB-Luc |
NFκB |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-p53-Luc |
p53 |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-RARE-Luc |
RAR |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-Rb-Luc |
Rb |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-SRE-Luc |
Elk-1/SRF |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pTA-TRE-Luc |
Thyroidreceptor |
Promega |
| 信号通路报告系统 |
M50 Super 8x TOPFlash TOPFlash |
|
Transheep |
| 信号通路报告系统 |
pFA2-Elk1 |
FA2-Elk1 |
Stratagene |
| 信号通路报告系统 |
pFC-MEKK |
FC-MEKK |
Stratagene |
| 信号通路报告系统 |
pGL2Basic-EcadK1 |
EcadK1 |
Transheep |
| 信号通路报告系统 |
pGL2Basic-EcadK1/EpaIMUT/EboxMUT/Ebox2MUT |
EcadK1 |
Transheep |
| 信号通路报告系统 |
pGL3.0-IFNβ-luc |
|
Transheep |
| 信号通路报告系统 |
pCRE-SEAP |
|
Clontech |
| 信号通路报告系统 |
TOPFlash |
|
Millipore |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.10 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.11 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.13 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.15 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.17 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.19 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.22 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.26 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.27 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.29 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.30 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.75 |
|
Promega |
| 信号通路报告系统 |
pGL4.79 |
|
Promega |
相关试剂
双荧光素酶报告基因检测试剂盒
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| TsB0027-1 |
报告基因细胞裂解液 |
60ml×10 |
| RG009-2 |
萤火虫荧光素酶检测试剂 |
10ml×10 |
| RG009-3 |
Renilla荧光素酶检测缓冲液 |
10ml×10 |
| RG009-4 |
Renilla荧光素酶检测底物 |
0.1ml×10
|
| RG009-5 |
相关载体 |
5ug质粒&500ul菌液 |
Transheep生产的双荧光素酶报告基因检测试剂盒(Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit)，是先以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)，后以coelenterazine为底物来检测海肾荧光素酶(Renilla reniformis luciferase，简称Renilla luciferase)，并且在后续加入Renilla luciferase的底物时同时加入了抑制Firefly luciferase催化luciferin发光的物质，使后续检测仅仅测定到Renilla luciferase的活性，实现双荧光素酶报告基因检测。
萤火虫荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光(bioluminescence)。海肾荧光素酶可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在 coelenterazine氧化的过程中也会发出生物荧光。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定上述荧光 素酶催化的氧化过程中释放的生物荧光。
通过荧光素酶和其底物这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣
的基因转录的调控元件克隆在firefly luciferase的上游或其他适当的地方，构建成报告基因质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低 判断刺激前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。Rinilla luciferase更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。
萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。海肾荧光素酶催化coelenterazine发
光的最强发光波长为465nm。
本试剂盒可以测定1000个样品。
TsB0027-1和TsB0027-3在4℃保存1个月有效，-20℃保存一年有效，-70℃可以长期保存；TsB0027-2和
TsB0027-4在-20℃避光保存6个月有效，-70℃避光保存一年有效。
加入Renilla荧光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫荧光素酶的抑制可以达到99%以上。但总会残留微量活性，因此，宜在转染时把Renilla荧光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫荧光素酶RLU读数的10%。Renilla荧光素酶的读数高于萤火虫荧光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。
为取得最佳测定效果，在用单管的荧光测定仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽
量控制在相同的时间内，例如30秒内。
由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
为保证荧光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时
间暴露于室温。一般来说，如果不分装使用三次(期间冻融三次)，对测定结果无明显影响。
样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品最好使用相同的测定时间。
- 特别注意：Renilla荧光素酶检测工作液后需配制后立即使用，不可配制成工作液后长期保存。
Renilla荧光素酶检测工作液不太稳定，配制后如果不能立即使用在-20℃可以保存5-10天左右活力会有轻微下降，室温放置一天会导致活力下降5-10%或更多，4℃放置10天左右会导致活力下降10-20％或更多。
TsB0027-4 Renilla荧光素酶检测底物(100X)配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于0.1ml的情况，此时用无水乙醇把体积补足至0.1ml，并混匀后即可使用。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
