启动子效率验证
启动子是基因的重要组成部分,它的主要功能是控制基因表达(转录)的起始时间和表达的程度。启动子就像“开关”,决定基因的活动。但启动子本身并不控制基 因活动,而是通过与转录因子结合而控制基因活动。启动子一般分为广谱表达型启动子、组织特异性启动子、肿瘤特异性启动子等多种形式。基因的启动子部分发生 改变(突变),则可能导致基因表达的调节障碍。这种变化常见于恶性肿瘤。
研究背景
鉴于启动子的重要功能,目前对启动子的研究仍旧是一个热门话题。
启动子特点
研究思路
对启动子功能及结构的研究,可以从以下几个方面着手:
研究路线
研究所涉及到的实验技术
启动子荧光素酶验证
pGL4启动子报告克隆在Luc2报告基因上游插入一段1.2~1.5 kb的序列,这段插入序列与基因转录起始位点(TSS)上游大约1.5kb到下游200bp之间的5'侧翼序列一致,可以通过观察荧光素酶的活性来研究启动子对基因的调节作用。
权阳生物可提供预制和定制的pGL-Promoter启动子克隆,包括单报告基因载体系统和双报告基因载体系统。单报告基因载体系统以Rluc、 mCherry或GFP作为启动子的报告基因;双报告基因载体系统以Luc作为启动子报告基因,以Rluc作为信号标准化的内参,可在活细胞中对超过15000种人和16000种小鼠启动子进行实时活性分析。
图1.pGL4 启动子报告克隆工作流程
pGL 启动子克隆可以将Rluc作为第二个报告子和内参。这种双报告系统可以对多样本常规转染进行精确比较。
图2. 不同启动子在H1B1B和HEK293T细胞中的活性分析。双报告系统启动子克隆和对照以两个重复转染进两种细胞中。转染24小时((HEK293T)和48小时(H1B1B)后分析样品。NEG(包含非启动子序列)和和EMPTY(载体不含启动子)作为阴性对照。 |