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Western blot检测


Western Blot
    免疫印迹immunoblotting又称蛋白质印迹western blot,它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝
胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏
感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。 
    权阳生物为提供标准western blot技术服务(您需自备一抗)。并对band进行灰度分析,得出蛋白表达相对定量结果。
服务要求
    需新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白粗提液,阳性对照样品(如果有), 检测目的蛋白的一抗(或由Transheep代购)。组织样品不少于50mg
;细胞不少于5×106个;总蛋白浓度不低于 2μg/μl(至少50μl)。
服务基本流程
    1. 蛋白提取和定量(如果提供蛋白样品,则直接电泳预实验检测抗体特异性);
    2. SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;
    3. 转膜(PVDF膜);
    4. 封闭 (5%脱脂奶粉);
    5. 一抗孵育(其中内参基因为Tubulin或HistoneH3.1);
    6. 二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续,则收相关预实验费用);
    7. 显色(ECL);
    8. 曝光、洗片、灰度分析;

服务流程


服务说明


Western Blot基因表达范例
收集生长状态良好的目的细胞,提取蛋白,采用Western Blot的方法检测目的基因的表达情况。
检测结果如下:   


 PC为抗体说明书建议的作为阳性对照用细胞蛋白样品。上图显示A细胞目的基因表达丰度更高。Western blot检测抗体是否有效,
检测目的细胞中目的基因的内源表达。 

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亚克隆构建
3,UTR验证实验
启动子合成及验证
慢病毒包装
腺病毒包装
稳转株构建