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                                                                                                              shRNA载体构建

服务介绍

shRNA(short hairpin RNA, shRNA)是一段小发卡或短发卡RNA序列,一般长19~23bp,常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。利用载体把shRNA导入细胞,载体中的U6或H1启动子确保shRNA的表达;shRNA的发卡结构可被细胞机制切割成siRNA,然后siRNA结合到RNA诱导沉默复合物上(RNA induce
-d silencing complex,RISC),该复合物能够结合到目的mRNAs并将其降解。通过载体可以将shRNA整合到细胞基因组中,从而使细胞长期稳定表达shRNA。
权阳生物可提供多种shRNA表达载体,如慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、以及普通的真核表达载体等;同时也有多种荧光报告基因可供选择,如GFP、eGFP、tdTomato、YEP等;另外还有药筛基因可供选择:Puromycin、Neomycin等,用于后期构建稳定表达shRNA的细胞株。

服务流程

1、接受客户目标基因信息; 
2、分析目标基因,并设计高质量的shRNA序列(客户可从Transheep shRNA 文库中自行选择序列); 
3、PCR退火形成shRNA双链; 
4、将shRNA双链克隆至含有U6或H1启动子的表达载体上; 
5、测序以确保插入序列的正确性; 
6、向客户提交测序结果与实验方法报告单。

载体选择(可到Transheep 质粒库中选择相应载体)

载体举例
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慢病毒载体   腺病毒载体
plko.1-TRC   pShuttle-U6
plko.1 puro   pShuttle-U6-CMV-RFP
plko.3G   pShuttle-U6-CMV-EGFP
pLVX-sh1    
pLKO-puro-TurboGFP    
pLVX-sh2    
pLVX-U6-RFP-Puro    
pLVX-U6-GFP-Puro    
pLVX-U6-GFP    
pLVX-U6-tdTomato    
pLVX-U6-YFP