🧬 siRNA（小干扰RNA）概述
siRNA 是长度为 21–23 nt 的双链 RNA 分子，通过 RNAi 途径特异性降解靶 mRNA。本工具基于 Target Seq（正义链 21 bp）自动生成双链 siRNA 序列。
📐 siRNA 双链结构
Sense 链（正义链）：
5'-(21 nt Target Seq)-dTdT-3'
Antisense 链（反义链）：
5'-(21 nt 反向互补)-dTdT-3'
dTdT = 3' 突出端，增强 siRNA 稳定性及 RISC 装载效率
⚙️ 作用机制
- 外源 siRNA 双链进入细胞质
- 与 RISC（RNA 诱导沉默复合体）结合
- 反义链（引导链）保留在 RISC 中，正义链被降解
- RISC 通过碱基互补配对识别靶 mRNA
- Ago2 蛋白切割靶 mRNA，导致基因沉默
🧪 转染注意事项
- 使用阳离子脂质体转染试剂（如 Lipofectamine RNAiMAX）
- siRNA 终浓度通常为 10–50 nM
- 设阴性对照（scramble siRNA）和未处理对照
- 通过 qPCR 或 Western blot 验证敲低效率（24–72h 后）